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2014年第3期(发布时间: Dec 23, 2014 发布者:李阳)  下载: 2014年第3期.doc       全选  导出
1   2014-12-23 11:38:51.117 针对结核病新型诊断工具——自动化MODS在资源有限地区使用情况的评价研究 (点击量:8)

目前迫切需要一些简单、快速且经济实惠的诊断测试方法用于减轻结核病给发展中国家带来的巨大疾病负担。显微镜观察药物敏感性检测技术(MODS)虽然是一种比较理想的选择,但生物安全性和检测效果方面的担忧使其尚未被广泛使用。基于此,来自加拿大阿尔伯塔大学公共卫生学院、泰国清莱TB/HIV研究基金会、世卫组织跨国结核病实验室(SRLN)等机构的研究人员合作评价了自动化MODS(与MODS的操作原理相似,但也作出了一些重要修正,使其在检测资源有限地区人群结核病方面能够很好地替代MODS)在资源有限地区人群结核病检测方面的应用状况,其相关成果于2014年11月5日在线发表于Journal of Clinical Microbiology。

研究人员于2011年5月至2012年9月间连续采集了清莱17家医院内临床诊断为结核与非结核人群的痰标本,用于在预先设置好的环境下比较自动化MODS与金标准液体培养法——分枝杆菌生长指示管(MGIT)960外加MPT64快速检测试剂盒在鉴别结核病和非结核病样本以及区分结核病和耐多药结核病样本方面的准确性和有效性。

一共有360份标本用于评估,根据MGIT 960的检测结果,其中221份标本(61.4%)的结核杆菌培养结果为阳性,139份(38.6%)为阴性。针对221份真阳性标本,采用自动化MODS检测出阳性标本212份,阴性标本9份(灵敏度达到95.9%;95%置信区间[CI]为92.4%~98.1%);针对139份真阴性标本,采用自动化MODS检测出阳性标本135份,阳性标本4份(特异度达到97.1%,95%置信区间[CI]为92.8%~99.2%)。此外,研究发现用于自动化MODS检测的阳性标本平均培养时间为10天(四分位区间为8至13天)。

综上所述,自动化MODS在资源有限地区是一种有效且代价敏感的替代性结核病诊断工具。

2   2014-12-23 11:41:18.1 针对结核杆菌吡嗪酰胺药敏试验双相介质检测方法的评价研究 (点击量:2)

吡嗪酰胺是一类重要的一线抗结核药物,与其相关的可靠药敏试验(DST)数据具有重要的临床意义。然而,由于吡嗪酰胺的活性对pH敏感,致使对其进行体外测试具有一定的挑战性。The BACTEC MGIT 960曾被认为是一种主要的参考技术,但Wayne's测试法虽然存在结果较难解释的问题,被认为是一种合适的替代方法。此外,采用双相介质检测法(BMA)是另一备选方案。基于此,来自伦敦帝国理工学院等机构的研究人员对BMA和MGIT两种方法进行了比较,并对pncA基因突变进行了筛查,其相关成果于2014年6月23日发表在Journal of Antimicrobial Chemotherapy上。

该研究将20个菌株接种于含有2毫升改良罗氏培养基、2毫升Kirchner半固体培养基且pH为5.2或5.5的试管中(培养基的吡嗪酰胺临界浓度为66ml/L),培育2周并观察培育结果,并对培育结果、MGIT检测结果和DNA测序结果进行了比较。

研究得到了19个菌株一式两份的培育结果,剩下的一个菌株仅在其中一个培养基中存活,即可重复率为95%。在这19个菌株中,有11个对吡嗪酰胺敏感,7个耐受,剩下的一个菌株在培育初期是敏感的,但在重复测试时变为耐受。此外,在pH为5.5环境下测试为敏感的两个菌株在pH为5.2的环境中表现为耐受结果。

综上所述,对于吡嗪酰胺而言,BMA可作为一种可靠的低成本DST备选方案,特别是在采用自制固体培养基进行DST的实验室中。然而,由于BMA的主要缺陷是培育时间较长,因此尤其是对于那些多重耐药结核病呈现增长态势的地区来说,需要一种可靠且价格合理的测试方法来检测吡嗪酰胺的耐药性。这里建议在进行吡嗪酰胺药敏试验的同时,要开展常规的实验室能力比对验证(Proficiency Testing,PT)。

3   2014-12-23 11:42:57.49 新型DNA测序方法在结核病诊断中的应用 (点击量:4)

来自英国和冈比亚的研究人员开发了一种新的结核病诊断方法。该方法通过对从痰中提取的DNA(一种被称为宏基因组学的技术)进行直接测序来检测和鉴定引起TB的细菌,而无需将时间浪费在实验室细菌的培养上。

该项研究发表于同行评议杂志PeerJ,由华威医学院微生物基因组学教授Mark Pallen和位于冈比亚的英国医学研究理事会(MRC)下属的结核病诊断实验室主任Martin Antonio博士指导完成。

Pallen说:“采用传统方法对结核病进行实验室诊断是一个旷日持久的过程,需要花费数周或数月时间。而且依赖实验室培养就等于使用可以回朔至19世纪80年代的技术!采用了最新高通量测序技术及一些智能生物信息学知识的宏基因组学使得我们能够在一两天内对引起TB的细菌进行检测和鉴定,且无需对细菌进行培养。此外,还能够深入了解它们的基因组序列及其所属的谱系。”

在该研究中,Pallen和他的两个同事(一年级博士生Emma Doughty和生物信息学家Martin Sergeant博士)与来自非洲的科学家Martin Antonio博士及Ifedayo Adetifa博士合作开发并利用了新型测序和分析方法。Antonio说:“TB在非洲乃至全世界仍然是一个重要问题,因此能够成为开发出针对这种致死性疾病的新诊断方法中的一员是令人兴奋的。”

研究团队检测了所有8份痰标本中的TB细菌序列,并将其中7份标本中的细菌分配到一个已知的谱系中,发现有两份标本含有“非洲”分枝杆菌(结核杆菌的一种,常见于西非)序列。

文章第一作者Emma Doughty说道:“希望能够分析更多样本以改进我们的技术,这样,我们就能直接从宏基因组序列中检测出药物耐受性。到目前为止,该研究对我的博士生涯而言是一个良好的开始。”

Pallen和他的合作者们之前就使用过宏基因组学技术来检测人体样本中的病原菌。去年,他的团队使用宏基因组学技术从大肠杆菌粪便样本中获得了一例爆发菌株的基因组,并复原了一个来自于200岁匈牙利木乃伊的TB基因组。今年早些时候,他们又复原了一个来自意大利撒丁岛700岁骨架的羊种布鲁氏菌基因组。该种细菌能够在牲畜和人类群体引起一种被称为布氏杆菌病的感染。

Pallen和Antonio团队的目标是以更大范围的样本为基础来测试宏基因组学技术。他们希望该技术能有助于检测由一种以上细菌引起的混合感染。然而,他们也强调该技术成为常规检测手段还需一定的时日。

Pallen说道:“在研究过程中我们虽然已经对相关的原理进行了论证,但仍需要提高该技术的灵敏性以改进我们的工作流程。然而,暂且将困难放在一边,一个值得庆祝的事实是宏基因组学技术随时都能够用来记录过去和现阶段的感染状况,揭示病原微生物的出现、演变和传播。”

信息来源:1.Emma L. Doughty, Martin J. Sergeant, Ifedayo Adetifa, Martin Antonio, Mark J. Pallen. Culture-independent detection and characterisation ofMycobacterium tuberculosisandM. africanumin sputum samples using shotgun metagenomics on a benchtop sequencer. PeerJ, 2014; 2: e585 DOI: 10.7717/peerj.585

4   2014-12-23 11:45:00.76 Quantiferon Gold-in-tube assay for TB screening in HIV infected children: influence of quantitative values (点击量:2)

HIV感染儿童的TB发病风险呈上升趋势,因而需要每年对其进行TB筛查。然而,目前使用γ干扰素释放试验分析技术(IGRA)对其进行TB筛查的数据有限,因此来自印度基督教医学院、多伦多大学病童医院、蒙特利尔大学及麦吉尔国际结核病中心的6名研究人员回顾性分析了Quantiferon Gold-in-tube(一种IGRA技术)在相对健康且免疫稳定的HIV感染儿童潜伏结核感染(LTBI)筛查中的应用状况,其相关成果于2014年9月23日发表在BMC Infectious Diseases上。

该研究对无结核病史的HIV感染儿童进行潜伏结核感染的筛查,作为其日常护理的一部分。此外,他们还经历了TB评估风险,并接受了QFT检测和结核菌素皮肤试验(TST)。其中QFT要根据定量值结果重复进行2或3次,并对结果进行独立测试验证。

共有81名儿童进行了109次QFT测试,且均表现出良好的有丝分裂原反应。其中15名儿童(18.5%)的初始QFT结果为阳性:9人定量IGRA反应值为0.35-1.0 IU/mL;5人为1.0-10 IU/mL;1人>10 IU/mL。测试结果为阳性的儿童均无结核菌暴露或患有结核病的记录。此外,研究发现QFT阳性和阴性组的基线特征是相似的。

为期17周的重复测试结果显示阴性率恢复至79%。所有QFT阳性人群的重复盲性独立测试结果同随机选择的初始阴性测试结果一致率达到96%。此外,7名儿童(QFT>1.0 IU/mL或TST结果阳性)接受了异烟肼预防性治疗,且在2年的密切随访过程中发现所有人均未出现结核病进一步发展的状况。

综上所述,QFT对于相对健康且免疫稳定的HIV感染儿童LTBI筛查而言,是一种有效的方法。然而,重复测试过程中结果回归阴性以及尚未对QFT与TST结果和TB暴露风险的相关性进行分析会为解读QFT在HIV感染儿童TB筛查中的应用价值带来诸多困难。

5   2014-12-23 11:46:32.053 显微镜观察药物敏感性检测技术在HIV感染者结核病(TB)和耐多药结核(MDR-TB)诊断中的应用:一项系统综述和meta分析 (点击量:1)

为了评价显微镜观察药物敏感性检测技术(MODS)对HIV感染者中结核的诊断准确率,来自西班牙、莫桑比克和瑞士的研究人员开展了一项系统综述和meta分析,其相关成果于2014年9月3日发表在European Respiratory Journal上。

研究人员检索了MEDLINE、EMBASE、LILACS、Cochrane临床对照试验中心注册库、非洲医学索引、ResearchGate、SciELO、传染病和热带医学领域召开的重要会议涉及的摘要以及其它相关资源,并仅纳入了评价MODS对HIV感染患者结核的诊断效果以及将MODS作为诊断金标准的研究。此外,采用双变量模型计算敏感性和特异性。

一共检索到3259条资源。从中挑选29篇文献进行通篇阅读,并对其中涉及的10项研究(包括3075例试验样本)进行最终的统计分析,发现MODS用于诊断TB的灵敏度为88.3%(95%CI为86.18-90.2%)、特异度为98.2%(95%CI为97.75-98.55%);MODS用于诊断MDR-TB的灵敏度为89%(95%CI为66.07-97%)、特异度为100%(95%CI为94.81-100%);MODS用于诊断涂片阴性肺结核的的灵敏度为88.2%(95%CI为86.1-89.9%)、特异度为98.2%(95%CI为96.8-98.9%)。上述诊断所使用的每份样本花费的成本从0.72美元到7.31美元不等,阳性样本的平均诊断时间为8.24天。

综上所述,采用MODS对HIV感染者中结核和耐多药结核进行诊断的准确度较高、花费较低且耗费时间较短。

6   2014-12-23 11:47:44.42 实时聚合酶链反应(PCR)用于支气管内膜结核(EBTB)快速诊断的效果研究 (点击量:0)

       由于支气管内膜结核(EBTB)的表现方式多样且痰涂片经常检测不到抗酸杆菌(AFB),致使确诊该病具有一定的挑战性。基于此,来自中国医科大学附属第一医院的研究人员评估了采用PCR技术检测支气管镜活检标本对于EBTB诊断的效果,其相关成果于2014年8月18日发表在International Journal of Infectious Diseases上。

        研究人员对74名EBTB患者活检组织中的结核杆菌DNA进行前瞻性实时PCR扩增,并对实时PCR检测、金胺O染色痰涂片检查及支气管刷片检查的诊断率进行比较。此外,还对检查结果是否依赖于EBTB支气管镜亚型进行了评估。

        痰涂片检查的诊断率为4.1%(3/74),支气管刷片检查的诊断率为39.2%(29/74),实时PCR检测的诊断率为89.2%(66/74)。对于颗粒状及干酪样EBTB而言,采用实时PCR熔解曲线分析法的诊断率要显著高于利用支气管刷片检查来寻找抗酸杆菌的诊断率(p<0.01)。

        实时PCR技术对EBTB患者活检组织中结核杆菌DNA的检测要比痰涂片检查和支气管刷片检查更为敏感,在疾病早期阶段也是如此。PCR方法可被看作是对痰涂片和刷片检查方法的一个很好的补充,使得EBTB诊断更为快速、治疗也相应的更为及时。

7   2014-12-23 11:49:03.747 使用TB16.3-echA1融合蛋白能够改善结核病血清学诊断的灵敏性 (点击量:1)

       该研究旨在开发及评估一种结核病诊断方法,具体为使用一些灵敏性增强的融合蛋白来检测血浆中的抗体,由来自巴基斯坦旁遮普大学和加州大学的研究人员共同完成,其相关成果于2014年7月24日在Tuberculosis上发表。
       研究首先采用PCR技术从结核杆菌样本中扩增出分别编码与TB16.3和echA1蛋白相对应的TB16.3和echA1基因区域的DNA片段;然后通过一系列的限制和捆绑措施,在大肠杆菌中构建两种新型融合蛋白——TB16.3-echA1和TB16.3-tnPstS1,并使其得到表达;接下来对其进行筛选用于检测人血浆中的抗体。结果显示,个体抗原TB16.3、echA1、tnPstS1以及融合蛋白TB16.3-tnPstS1、TB16.3-echA1的灵敏性分别为29%、25.5%、42.8%、40.0%和47.2%。其中TB16.3-tnPstS1的灵敏性较低可能与两种蛋白的结构安排掩盖了部分表位有关,而TB16.3-echA1的灵敏性较高可能是由于两种蛋白之间的相互作用较弱,从而使其表位能够自由地对抗体进行束缚。 实证研究显示使用融合蛋白TB16.3-tnPstS1或TB16.3-echA1对结核病患者进行检测的阳性率为64%。
      综上所述,新型融合蛋白TB16.3-echA1具有潜在的改善结核病血清学诊断灵敏性和可靠性的能力。

8   2014-12-23 11:50:20.28 引进Xpert MTB/RIF检测技术对南非夸祖鲁-纳塔尔省耐多药结核病诊断的影响研究 (点击量:1)

       将Xpert MTB/RIF(Xpert)检测技术引入南非用于辅助治疗那些需要等待表型或基因型药敏试验来确诊的耐利福平结核病患者被认为是有必要的。基于此,来自夸祖鲁-纳塔尔大学、南非国家卫生实验室服务部及南非艾滋病项目研究中心的研究人员合作研究了Xpert对夸祖鲁-纳塔尔省耐药结核病负担最重地区的人群结核病诊断和管理的影响,其相关成果于2014年8月16日发表在BMC Infectious Diseases上。

        回溯性搜集2011年3月至2012年4月间接受Xpert检测的所有利福平耐药患者。比较Xpert检测结果和表型或基因型药敏试验结果。基于患者的病历记录来确定其初始治疗时间。

       在637名接受Xpert检测的患者当中,50%得到确诊,其中三分之一的患者于当天再次接受Xpert检测。研究发现利福平的不一致率和单耐药率分别为8.8%和13.4%,且表型或基因型药敏试验诊断结果间没有差异。在那些已经开始接受治疗的患者中,有28%、40%、21% 和8%的患者分别于2周、1个月、2个月和3个月内接受了Xpert检测。此外,剩余3%的患者没有接受任何治疗,仍处于观察阶段。

       需要说明的是,Xpert检测技术的使用需要遵从一些检测算法,这样才能使所有的利福平耐药患者得到确诊,以确保对其进行适当的管理。然而,尽管Xpert检测时间短,但本研究中仍有约70%的患者在一个月内才开始接受治疗,提示还需要进一步完善卫生系统以缩短疾病的治疗时滞。

9   2014-12-23 11:52:34.94 与结核性淋巴结炎(TBL)相关的CD8+T细胞数量和功能变化研究 (点击量:0)

       CD8+T细胞分泌的1型和17型细胞因子和细胞毒分子在肺结核(PTB)免疫和保护方面发挥着重要作用,但其在结核性淋巴结炎(TBL)方面的作用还不得而知。为了明确CD8+T细胞表达的1型、2型和17型细胞因子和细胞毒分子在TBL方面的分布和功能,来自印度国家结核病研究所及美国国立卫生研究院NIH过敏和传染病研究所(NIAID)等机构的研究人员分析了肺结核患者全血中的基线值和分枝杆菌抗原特异性免疫应答,并与TBL患者的分析结果进行了比较,其相关成果于2014年6月30日发表在Tuberculosis上。

        研究发现,与PTB患者相比,TBL患者基线值和经分枝杆菌抗原刺激的CD8+T细胞表达的1型(IL-2和TNFα)和17型(IL-17A和IL-17F)细胞因子的数量升高,而CD8+T细胞表达的穿孔素、颗粒酶B和CD107a的数量则降低。如果在抗原刺激过程中对IL-1R和IL-6R实施封锁,则可以降低CD8+T细胞表达的1型和17型细胞因子。

        结果显示,IL-1和IL6依赖性CD8+T细胞表达的1型和17型细胞因子扩散及细胞毒分子数量的改变是TBL的两个重要特征,说明这些细胞与TBL的发病机制有着重要联系。

10   2014-12-23 11:54:23.687 针对感染期高表达结核杆菌基因的免疫信息学研究 (点击量:1)

       对于疫苗研发而言,最重要的靶标是感染期微生物体内一些高表达的蛋白质。据报道在感染不同阶段,体内许多结核杆菌(Mtb)蛋白也会被表达。基于此,来自胡志明市生物技术中心、马来西亚理科大学、古巴芬莱研究所等机构的研究人员分析了感染不同阶段人和动物体内的Mtb基因表达谱数据库(已公开),其相关成果于2014年6月25日在Tuberculosis上发表。

       研究人员通过对数据库的分析,从中选出了在感染活动期、潜伏期和再激活期均得到高表达的38种蛋白,并采用HLAPred对其中的T细胞表位进行了预测,采用BCEPred联合ABCPred对其中的B细胞表位进行了预测。对于每一种被选中的蛋白来说,同时包含T细胞和B细胞表位的区域即可被看作是设计抗结核疫苗的重要参考靶标。